Bikinkoninik asit tahlili

Bikinkoninik asit tahlili (bicinchoninic acid assay - BCA assay), Smith tahlili olarak da bilinir. Tahlil ismini yaratıcısı Pierce Kimyasal Şirketi' ndeki Paul K. Smith' den alır.^[1] Bu biyokimyasal metod, Lowry, Bradford ve Biüret metodlarında olduğu gibi bir solusyondaki (0.5 μg/mL - 1.5 mg/mL) total protein konsantrasyonunun belirlenmesinde kullanılır. Total protein konsantrasyonu numune solusyondaki yeşilden mora renk değişimi ile gözükür. Renk değişimi protein konsantrasyonu ile değişir. Kolorimetrik tekniklerin yardımı ile protein konsantrasyonu belirlenir.

Mekanizma

BCA stok solusyonu bileşenlerini oldukça bazik olan pH 11.25 ortamda barındırır. BCA stoğu, bikinkoninik asit, sodyum karbonat, sodyum bikarbonat, sodyum tartarat ve bakır (II) sülfat pentahidrat içerir.

BCA tahlili temelinde iki tepkimeye dayanır. İlki proteindeki peptit bağlarının Cu²⁺ iyonlarını Cu⁺ya indirgemesidir ve bu adım sıcaklığa bağlı bir reaksiyondur. Cu²⁺ solusyondaki protein sayısı ile paralel indirgenir. İkinci adımda ise bikinkoninik asitin 2 molekülü ile Cu⁺ iyonu birleşerek 562 nm dalgaboyun'da ışığı güçlü bir şekilde emen mor renkli komplexi oluşturular.

The bikinkoninik asit Cu⁺ komplexi proteindeki sistein, tiriptofan, tirozin ve sistinden etkilenirler. Yüksek sıcaklıklarda (37 - 60 °C), peptit bağları reaksiyon komplexinin oluşmasına yardım eder. BCA tahlilinin yüksek sıcaklıktaki ortamda yapılması önerilir. Bununla tahlil hassasiyetini artırmak ve eşit dağılmamış aminoasit içeriğinden kaynaklanan çeşitliliği engellemek hedeflenir.^[2]

Solusyonda bulunan protein miktarı absorpsiyon spektroskopisi ölçülerek ve konsantrasyonu bilinen bir protein solusyonu (standart) ile karşılaştırılarak nicelleştirilebilir.

Ayrıca bakınız

Biüret testi

Kaynakça

^ Smith, P.K. (1985). "Measurement of protein using bicinchoninic acid". Anal. Biochem. 150 (1). ss. 76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7. PMID 3843705.
^ Olsen BJ, Markwell J (2007). "Assays for the Determination of Protein Concentration" (PDF). Current Protocols in Protein Science. ss. 14-17. 5 Eylül 2012 tarihinde kaynağından arşivlendi (PDF)10 Nisan 2018.

Wiechelman, K.; Braun, R.; Fitzpatrick, J. (1988). "Investigation of the bicinchoninic acid protein assay: Identification of the groups responsible for color formation". Anal. Biochem. 175 (1). ss. 231-7. doi:10.1016/0003-2697(88)90383-1. PMID 3245570.
Stoscheck, CM. (1990). "Quantitation of Protein". Methods in Enzymology. Cilt 182. ss. 50-69. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P. PMID 2314256.

Dış bağlantılar

OpenWetWare 26 Nisan 2017 tarihinde Wayback Machine sitesinde arşivlendi.
BCA assay chemistry 25 Şubat 2015 tarihinde Wayback Machine sitesinde arşivlendi.

[1] Smith, P.K. (1985). "Measurement of protein using bicinchoninic acid". Anal. Biochem. 150 (1). ss. 76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7. PMID 3843705.

[2] Olsen BJ, Markwell J (2007). "Assays for the Determination of Protein Concentration" (PDF). Current Protocols in Protein Science. ss. 14-17. 5 Eylül 2012 tarihinde kaynağından arşivlendi (PDF)10 Nisan 2018.

[1]

[2]